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大鼠主动脉平滑肌细胞培养实验
点击次数:36 发布时间:2019-10-29
实验方法原理运用组织块贴壁法进行SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养,并用倒置相差显微镜观察、HE染色后形态学观察以及用免疫组化对培养细胞进行鉴定。
实验材料

SD大鼠

试剂、试剂盒

PBSFBSDMEM

仪器、耗材

手术剪手术钳眼科剪刀眼科镊子大头针手术刀培养皿

实验步骤一、实验步骤
 

1。 SD 大鼠(150-200 g),断头,浸入75%的酒精中15 min。


2. 置入超净台中,将大鼠固定于杀鼠板上,在无菌条件下打开腹腔,分离出胸主动脉、腹主动脉, 摘出。


3. PBS 清洗3 遍,剥去外膜,用手术刀片刮去内膜,留下中膜并将其移入1 mL 的培基中、剪成1x1 mm大小组织块。


4. 再将PBS清洗组织块,移入25 mL 的培养瓶中,用尖嘴弯管均匀贴好组织块,放入37℃、5% CO2的培养箱倒置培养6 小时后,待组织块贴壁后,再加入2.5 mL 培养液后放回培养箱中。


5. 随后每3 天予以全量换液。

二、结果

3-5 天后可见组织块周围有细胞爬出,大约2 周后80-90%融合。

收起 
注意事项

 第四步中最后加入2 mL 培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下,勿使组织块吹下。

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